DNA测序仪的操作步骤

(1) 取0.2ml的pcr管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加试剂：
所加试剂 测定模板管 标准对照管
bigdye mix 1μl 1μl
待测的质粒dna 1μl －
pgem-3zf (+) 双链dna － 1μl
待测dna的正向引物 1μl －
m13(-21)引物 － 1μl
灭菌去离子水 2μl 2μl
总反应体积5μl，不加轻矿物油或石蜡油，盖紧pcr管，用手指弹管混匀，稍离心。
(2) 将pcr管置于9600或2400型pcr仪上进行扩增。98℃变性2min后进行pcr循环，pcr循环参数为96℃ 10s，50℃ 5s，60℃4min，25个循环，扩增结束后设置4℃保温。 (1) 将混合物离心，将扩增产物转移到1.5ml ep管中。
(2) 加入25μl醋酸钠/乙醇混合液，充分振荡，置冰上10min以沉淀dna。12 000r/min于4℃离心30 min，小心弃上清。
(3) 加70%(v/v)的乙醇50μl洗涤沉淀2次。12 000r/min于4℃离心5min，小心弃上清和管壁的液珠，真空干燥沉淀10～15min。 (1) 加入12μl的tsr于离心管中，剧烈振荡，让其充分溶解dna沉淀，稍离心。
(2) 将溶液转移至盖体分离的0.2ml pcr管中，稍离心。
(3) 在pcr仪上进行热变性(95℃ 2min)，冰中骤冷，待上机。 测序完毕按仪器操作规程进行仪器清洗与保养。